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      邁博瑞 s

      NC轉印膜、PVDF轉印膜、正電荷尼龍轉印膜的優缺點對比

      標簽: 轉印膜

      目錄
      1、什么是Western Blot
      2、NC轉印膜、PVDF轉印膜、正電荷尼龍轉印膜的優缺點對比
      3、邁博瑞轉印膜推薦

       

      一、什么是Western Blot

      就像與SDS提供的電荷結合一樣,蛋白質可以在電場中從凝膠轉移到堅固的載體上,即從凝膠中“印跡”到膜。這種方法被稱為蛋白免疫印跡轉印。

      Western Blot

      蛋白免疫印跡法中蛋白從凝膠轉印到膜上


      轉膜方式主要有兩種:濕轉和半干轉。兩者原理相同,只是用于固定膠/膜疊層及施加電場的儀器有不同。半干轉耗時短,但是更適合小分子蛋白的轉印,而濕轉蛋白分子量范圍較寬,在Western Blot實驗中,常用的是濕轉。

       

      二、NC轉印膜、PVDF轉印膜、正電荷尼龍轉印膜的優缺點對比

      在蛋白質和核酸的轉移和檢測過程中,我們都常用的轉印膜有三種:正電荷尼龍轉印膜/硝酸纖維素NC轉印膜/聚偏二氟乙烯膜PVDF轉印膜。不同的轉印膜規格和參數不同。選擇正確、均一穩定的轉印膜對達到最佳的實驗結果起到關鍵性作用。

      PVDF轉印膜

      NC轉印膜

      正電荷尼龍轉印膜

      機械強度高、質地柔韌、易于保存
      化學穩定性好、耐腐蝕、不易降解
      相對較高的蛋白質結合能力和高信噪比
      可用于多次剝離和雜交
      需要甲醇等溶液浸泡預濕活化
      可用于Western雜交、dot/slot雜交、蛋白質測序、以及MS分析。

      極易破碎不易操作
      溶劑不耐受
      蛋白結合能力相對較低
      不利于多次剝離和雜交
      不需要預濕處理
      結合能力強、不需要活化
      背景淺、能進行多次免疫檢測并且功能基團壽命長
      適用于蛋白質印跡法、RNA印跡法、DNA印跡法和斑點雜交技術

      高的靈敏度和
      低的背景信號
      長耐久性、可耐受多次重復雜交試驗
      適用于Southern/Northern/Dot/Slot Blot實驗

      在蛋白免疫印跡法中,可根據靶蛋白分子大小選擇0.2 µm或0.45 µm孔徑的膜。在大多數應用中,PVDF和硝酸纖維素是等效的。請注意,PVDF的容量高于硝酸纖維素,但需要更仔細的預處理:根據凝膠大小將膜切割成適當大小,通常比凝膠稍大一點;在甲醇中浸泡約30秒;在ddH2O中清洗約1分鐘,然后在冰冷的轉印緩沖液中孵育5分鐘。凝膠還需要在冰冷的轉印緩沖液中平衡3-5分鐘。

       

      三、邁博瑞轉印膜推薦

      MS®轉印膜主要是參與Southern印跡雜交和Northern印跡雜交實驗,用于實現基因診斷,通常都是將雜交結果轉移到印記膜上,作為最終判斷依據。印跡膜有多種形式:0.2um和0.45um的PVDF轉印膜、硝酸纖維素轉印膜、(Nylon66)尼龍轉印膜,這是一種經驗證的western 雜交介質,PVDF用于高載量免疫印跡和蛋白測序。

      名稱 濕潤性 靈敏度和分辨率 背景 機械強度 溶劑耐受性 水潤性 蛋白結合能力 適用染色方法 檢測方式
      Nylon66印跡膜 親水性 較高 軟而結實 較差 緩沖溶液潤濕 >400μg/cm2 不能用陰離子染料 不能用陰離子染料,受限制
      NC轉印膜 親水性 干的NC膜易脆 緩沖溶液潤濕,避免氣泡 80-110μg/cm2 膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁 常規染色,可用放射性和非放射性檢測
      PVDF轉印膜 疏水性 機械強度高 100%的甲醇潤濕 125-200μg/cm2 膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁、考馬斯亮蘭 常規染色,較于NC膜可用考馬斯亮藍染色,ECL檢測和快速免疫檢測

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